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食品安全问题

方法注解

菌落总数测试片检测方法
方法编号:5011

1 适用范围: 可用于各类食品及原料中菌落总数的测定。也可用于与食品接触的容器、操作台和其他设备表面的卫生检测。

2 方法原理: 将营养培养基、凝胶和氯化三苯基四氮唑(TTC)显色剂等加载在试纸片,经加样、培养后,细菌菌落在测试片上显现出红色菌斑,通过计数报告结果。

3 操作方法
3.1 样品处理: 无菌称取样品25g(或25mL)放入含有225mL无菌生理盐水的采样瓶或均质杯内,经充分振摇(均质)做成1:10的稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内,用1mL灭菌吸管反复吸吹制成1:100的稀释液。以此类推,做出1:1000等稀释度的稀释液,每个稀释度更换一支灭菌吸管。
3.2接种: 一般食品选2~3个稀释度进行检测,含菌量少的液体样品(如食用纯水和矿泉水等)可直接用原液检测。将测试片放在水平台面上,揭开上面的透明薄膜,用灭菌吸管吸取样品原液或稀释液1mL,均匀加到中央的纸片上,轻轻将上盖膜放下,静置5 min使培养基凝固,最后用手轻轻地压一下。每个稀释度接种两片。
3.3培养: 将测试片叠在一起放回原自封袋中,透明面朝上水平置于恒温培养箱内,堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃,培养15~24h。

4 结果判断与计数:
4.1细菌在纸片上生长后会显示红色斑点,选择菌落数适中 (10个~100个)的纸片进行计数,乘以稀释倍数后即为每克 (或毫升)样品中所含的细菌菌落总数。菌落数在100以内时, 按实有数报告。大于100时,用二位有效数字, 二位有效数字后面的数字,以四舍五入方法计算, 并以10的指数来表示。
4.2计数原则与报告方式
4.2.1 通常选择菌落在10个~100个之间的纸片进行计数, 乘以稀释倍数报告之(见下表中例次1)。
国家标准菌落总数报告方式术语为cfu/g或mL, cfu的含义为菌落形成单位。
4.2.2 若有两个稀释度的菌落数在10个~100个之内, 两者的比值小于2,则取其平均数,若大于2,则采用稀释度小者报告 (见下表中例次2和例次3)。
4.2.3 若三个稀释度的菌落数都有在10个~100个之内时, 应选择二个低数值的平均数(见下表中例次4)。
4.2.4 若三个稀释度的菌落数均小于10个或大于100个时, 应重新试用更低或更高的稀释度进行菌落计数; 或采用均小于数量标准的最小值,或采用均大于数量标准的最大值 (见下表中例次5和例次6)。

实例 稀释度 两稀释度之比 选定计数稀释度 报告方式(个/g或个/mL)
10-1 10-2 10-3
1 158 76 5 10-2 7.6×103
2 208 68 12 1.8 10-2、10-3 9.4×103
3 265 82 50 6.1 10-2 8.2×103
4 98 50 15 10-1、10-2 3.0×103
5 8 5 1 10-1 8.0×10
6 295 174 106 10-3 1.1×105

5 表面取样方法: 加1mL灭菌生理盐水在测试片上,静置至少1h使培养基凝固;提起上层膜,使中央滤纸部分贴到待测物表面,用手在外侧轻压;然后将上盖膜合上,置培养箱内培养。

6 注意事项: 使用过的纸片上带有活菌,需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。

菌落数少时的情况 菌落数多时的情况
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